Рафиноза, захароза, глюкоза

Процедура за анализ

Въведение-

 Зърнените бобови култури играят важна роля за храненето на 

човека   и   животните.   Галактозил-захарозните   олигозахариди   (рафиноза, 
стахиоза и вербаскоза) са основни компоненти в много бобови растения, а 
анти-хранителната   активност   на   бобовите   растения   често   се   свързва   с 
присъствието   на   тези   олигозахариди.   Галактозил-захарозните 
олигозахариди не се хидролизират в горната част на чревния тракт, поради 
отсъствието  на  

 α

  -галактозидаза. В долната част на чревния тракт те се 

метаболизират чрез бактериално действие, произвеждайки метан, водород 
и въглероден диоксид, което води до метеоризъм и диария. Следователно, 
галактозил-захарозните   олигозахариди   са   фактор,   който   ограничава 
използването на бобови растения в моногастрични диети. Използвани са 
няколко   разтворителя   за   екстракция   на   галактозил-захарозни 
олигозахариди   от   брашно   на   бобови   семена.   Това   обикновено   са   смеси 
вода / алкохол. Преди (или едновременно с) екстракцията е жизненоважно 
да се инактивира ендогенната алфа-галактозидаза и инвертазата. Това може 
да се постигне чрез нагряване на брашното под обратен хладник в етанол 
или във водна етанолова смес преди брашното да се подложи на водна 
екстракция.   Идентифицирането   и   количественото   определяне   на 
екстрахираните галактозил-захарозни олигозахариди са постигнати, като се 
използва набор от хроматографски процедури, но много от тези методи са в 
най-добрия   случай,   полуколичествени.   Хроматографските   процедури, 
използващи високоефективна течна хроматография и течна хроматография 
при ниско налягане (използвайки Bio-Gel Р2) са количествени,но могат да 
отнемат   повече   време   за   процедурата,   особено   при   подготовката   на 
пробите.

Добре   известно   е,   че   рафинозата,   стахиозата   и   вербаскозата   се 
хидролизират от 

α

 -галактозидаза до D-галактоза и захароза. Биохимичните 

китове   за   измерване   на   рафиноза   са   търговски   достъпни.  

α 

-галактозидазата, използвана в тези китове (от зелени кафени зърна), бързо 
хидролизира рафинозата, но действа бавно върху стахиоза и вербаскоза и 
по   този   начин   не   дава   пълна   хидролиза   на   тези   олигозахариди   при 
препоръчаните   инкубационни   условия.   За   разлика   от   това,   ензимът,